冰凍切片

簡要描述：冰凍切片是一種在低溫條件下使組織快速冷卻到一定硬度，然后進(jìn)行切片的方法。其制作過程較石蠟切片快捷、簡便，多應(yīng)用于手術(shù)中的快速病理診斷。取下的新鮮組織應(yīng)立即放入超低溫冰箱或者液氮中，用干冰運(yùn)輸；

更新時(shí)間：2024-10-26 00:00:00
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1.取材:
應(yīng)盡可能快地采取新鮮的材料，防止組織發(fā)生死后變化。
2.速凍:
為了較好地保存細(xì)胞內(nèi)的酶活性或盡快制成切片標(biāo)本的需要，一般在取材后就要立刻對組織塊進(jìn)行速凍，使組織溫度驟降，縮短降溫的時(shí)間，減少冰晶的形成。液氮速凍切片法是實(shí)驗(yàn)室最常用的速凍切片方法。具體做法是將組織塊平放于軟塑瓶蓋或特制小盒內(nèi)(直徑約2cm)，如組織塊小可適量加OCT包埋劑浸沒組織，然后將特制小盒緩緩平放入盛有液氮的小杯內(nèi)，當(dāng)盒底部接觸液氮時(shí)即開始?xì)饣序v，此時(shí)小盒保持原位切勿浸入液氮中，大約10-20s 組織即迅速冰結(jié)成塊。在制成凍塊后，即可置入恒冷箱切片機(jī)冰凍切片。若需要保存，應(yīng)快速以鋁箔或塑料薄膜封包，立即置入-80°C冰箱貯存?zhèn)溆谩?/p>

3.固定:
樣品托上涂一層OCT包埋膠，將速凍組織置于其上，4"C冰箱預(yù)冷5-10min讓0CT膠浸透組織。

取下組織置于錫箔或者玻片上，樣品托速凍。
組織置于樣品托上，其上再添一層OCT膠，以完全覆蓋為宜，速
凍架(PE)上30min。
4.切片:
恒溫冰凍切片機(jī)為較理想的冰凍切片機(jī)，其基本結(jié)構(gòu)是將切片機(jī)置于低溫密閉室內(nèi)，故切片時(shí)不受外界溫度和環(huán)境影響，可連續(xù)切薄片至5-10ym。切片時(shí)，低溫室內(nèi)溫度以-15°C~-20°C為宜，溫度過低組織易破碎，抗卷板的位置及角度要適當(dāng)，載玻片附貼組織切片，切勿上下移動。切好室溫放置30min后，入4C丙酮固定5- 10min,烘箱干燥20min。PBS 洗5minX3。進(jìn)行抗原熱修復(fù)，微波熱修復(fù)也可，室溫自然冷卻。可用3%H202 孵育5~10min，消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。

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